范围:本标准规定了刺梨及其制品中总黄酮含量（以芦丁计）测定的紫外分光光度法。 本标准适用于刺梨鲜果、刺梨干果、刺梨果脯、刺梨冻干粉、刺梨喷干粉、刺梨原汁、刺梨浓缩汁等刺梨及其制品中总黄酮含量的测定; 主要技术内容:4  方法原理黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称。溶于乙醇的黄酮类化合物在弱碱性条件下，与铝盐络合反应后生成有色物质，可在420 nm波长附近产生最大吸收。在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比。与芦丁标准品比较，可定量测定黄酮类化合物的含量。5  试剂和材料5.1  试剂除另有规定外，仅使用分析纯试剂和GB/T 6682规定的一级水。5.1.1  芦丁（C27H30O16，CAS号：153-18-4）标准品，纯度 ≥ 98.0%。5.1.2  无水乙醇（C2H6O）。5.1.3  硝酸铝[Al.(NO3)3·9H2O]。5.1.4  醋酸钾（C2H3KO2）。5.2  试剂配制5.2.1  芦丁对照品溶液（1 mg/mL）：精密称取50 mg（精确至0.1 mg）芦丁标准品，加少量无水乙醇溶解，转移至50 mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀。5.2.2  硝酸铝溶液（100 g/L）：称取Al(NO3)3·9(H2O) 17.60 g（精确至0.01 g），加少量水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。5.2.3  醋酸钾溶液（98 g/L）：称取C2H3KO2 9.80 g（精确至 0.01 g），加少量水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。6  仪器和设备6.1  紫外分光光度计。6.2  高速破壁机。6.3  分析天平，感量为0.0001 g。6.4  超声波提取器。6.5  离心机，4000 r/min。6.6  组织捣碎机。7  分析步骤7.1  试样制备将刺梨鲜果（3.1）刺梨鲜果去皮、去籽，组织捣碎机打浆，混合均匀，备用；去除刺梨果干（3.2）和刺梨果脯（3.3）中可见杂质，用高速破壁机粉碎，将其制成粉状，备用；刺梨冻干粉（3.4 ）和刺梨喷干粉（3.5）研磨均匀备用。7.2  试样提取7.2.1  固态试样：取7.1样品0.5 ~ 2 g，精密称定（精确到0.0001 g），置烘干恒重具塞锥形瓶中，加无水乙醇50 mL，称定重量，置于超声波提取器中超声处理1小时（每20分钟摇匀溶液一次），放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液离心10分钟，取上清液，即得。7.2.2  液态试样：刺梨原汁（3.6）、刺梨浓缩汁（3.7）等液体样品，精密量取样品1~10 mL，置烘干恒重具塞锥形瓶中，加无水乙醇50 mL，称定重量，置于超声波提取器中超声处理1小时（每20分钟摇匀溶液一次），放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液离心10分钟，取上清，即得。7.3  标准工作曲线准确量取芦丁对照品溶液（5.2.1）0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL分别置于50 mL容量瓶中，依次加入硝酸铝溶液（5.2.2）1 mL，醋酸钾溶液（5.2.3）1 mL，摇匀后加水至刻度。静置1小时后，在420 nm处测定吸光度。以50 mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。7.4  空白试验与试样的测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不添加试样。7.5  试样的测定准确量取提取液（7.2）1.0 mL置于50 mL容量瓶中，依次加入硝酸铝溶液（5.2.2）1 mL，醋酸钾溶液（5.2.3）1 mL，摇匀后加水至刻度。静置1小时后，在420 nm处测定吸光度。若样品总黄酮含量较高（吸光度不在0.1~0.8之间），可适当稀释后再进行分析测定。8  分析结果的表述8.1  刺梨鲜果、刺梨干果等固态试样试样中总黄酮含量（以芦丁计）以百分含量（%）表示，按公式（1）进行计算。x =   ……………………（1）式中:x───试样中总黄酮含量（以芦丁计）；m───由标准曲线查出的样品中芦丁质量，单位为毫克（mg）；M───试样质量，单位为克（g）；d───样品稀释倍数；计算结果保留小数点后两位。8.2  刺梨原汁、刺梨浓缩汁等液态试样样品中总黄酮含量（以芦丁计）以百分含量（%）表示，按式（2）计算：x =   ……………………（2）式中:x───试样中总黄酮含量（以芦丁计）；m───由标准曲线查出的样品中芦丁质量，单位为毫克（mg）；v───试样体积，单位为毫升（mL）；d───样品稀释倍数；计算结果保留小数点后两位。9  精密度在重复条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%