范围:本文件规定了宁夏地区红花茎叶中羟基红花黄色素A测定术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、样本采集与制备、测定步骤、结果计算等。 本文件适用于宁夏地区红花茎叶中羟基红花黄色素A含量测定。检出限为12.5μg/mL–800μg/mL; 主要技术内容:高效液相色谱法以经典的液相色谱为基础，以液体为流动相，将不同极性的溶剂泵入装有颗粒极细的高效固定相色谱柱中，在色谱柱中被分离并进入检测器进行检测，从而实现对样本的快速、高灵敏的检测。通过此方法对红花茎叶中羟基红花黄色素A进行检测和确证。7测定步骤7.1 试样的制备取红花茎叶样品于多功能粉碎机粉碎，过20目筛网备用。7.2 液相溶液的制备7.2.1 标准品溶液制备精密称取8 mg羟基黄色素A标准品，25%甲醇定容至10 mL容量瓶，即得800 μg/mL羟基红花黄色素A标准对照品溶液。7.2.2 试样品溶液制备精密称取过筛红花茎叶粉0.5 g，加入57%甲醇125 mL，超声温度70℃，超声功率80 HZ(250W)提取45 min，滤液经57%甲醇补至125 mL，经0.22 um滤膜过滤，即得红花茎叶试样品溶液7.3 试样的测定吸取供试品溶液20μL，在流动相为0.2%磷酸水（A）-乙腈(B)-甲醇(D)，梯度洗脱：0～6.5 min，80A%-9%B-11% D；6.5～12.5 min，75A%-15%B-10% D；柱温30℃，波长337 nm，流速1.0 mL/min条件下进样，重复测定3次。7.4 标曲建立取0.8 mg/mL羟基红花黄色素A标准对照品适量，分别配置浓度为800、400、200、100、50、25、12. 5 μg/mL的标准品溶液，在流动相为0.2%磷酸水（A）-乙腈(B)-甲醇(D)，梯度洗脱：0～6.5 min，80A%-9%B-11% D；6.5～12.5 min，75A%-15%B-10% D；柱温30℃，波长337 nm，流速1.0 mL/min条件下进样，以峰面积对应的质量浓度建立羟基红花黄色素A标准曲线。8  结果计算以峰面积值(Y)为纵坐标, 对照品进样量(X)为横坐标绘制标准曲，得,羟基红花黄色素A的回归方程为：Y=2058.83605X-6.1580135，r2=0.99981，测得红花茎叶提取物中羟基红花黄色素A含量占比为0.96%