范围:本文件描述了食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的高效液相色谱/质谱测定方法的的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告。 本文件适用于焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的定性定量测定。对含有γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物产品的含量检测可参照使用。 本文件检出限为4.2 μg/kg，定量限为13.9 μg/kg; 主要技术内容:4　原理试样用正己烷脱脂后，用20%甲醇/水溶液提取，提取液经减压蒸干后复溶，试样溶液用高效液相色谱/质谱联用仪的多反应监测（MRM）模式测定，外标法定量。5　试剂和材料5.1　试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。甲醇（色谱纯）。正己烷（分析纯）。甲酸（色谱纯）。甲醛（分析纯）。乙二醛(glyoxal, GO，分析纯)。γ-氨基丁酸（分析纯）。5.2　试剂配制甲醇/水溶液（20%）：移取 50 mL 甲醇（5.1.1）于 250 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。甲酸/水溶液（0.1%）：移取 0.25 mL 甲酸（5.1.3）于 250 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。5.3　标准品γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准品（C11H16N2O4 ,CAS号：805228-41-5）：纯度大于 98.0%。5.4　标准溶液的配置根据需要，用水配置γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的浓度为10 mg/L的溶液，用水稀释得到一系列浓度的标准溶液（100 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L、2000 μg/L、3000 μg/L、4000 μg/L）。6　仪器设备6.1　液相色谱仪/三重四极杆质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。6.2　粉碎机(细度 30～100目）。6.3　分析天平，感量为0.0 001克。6.4　分析天平，感量为0.00 001克。6.5　高速离心机（12 000转/分，14 000×g)。6.6　涡旋器（300 rpm～3 000 rpm）。6.7　常规实验室玻璃器皿。7　试验步骤7.1　样品的制备称取3 g粉碎后的样品（过60目筛）于50 mL离心管中，加入10 mL正己烷没过样品，涡旋5 min后于10000 rpm下离心10 min，重复3次以完全去除油脂，置于通风橱中将残余的正己烷挥干。向离心管中加入15 mL 20%甲醇/水溶液，涡旋5 min后于10000 rpm下离心10 min，收集上清液，该过程重复2次。将上清液减压蒸干，加20%甲醇/水溶解，定容至5 mL。用0.22 μm尼龙滤膜过滤，用HPLC-MS/MS的多反应监测模式(MRM)测定样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛含量。7.2　色谱测定7.2.1　高效液相色谱参考条件a）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（C18） Aq柱，填料粒径 5.0 μm，柱长250 mm，内径 4.6 μm，或其他等效色谱柱；b）流动相：A相为含 0.1% 甲酸/水溶液，B相为甲醇，梯度洗脱程度：0～2 min，5% B～95% B；2～8 min，95% B～95% B；8 min～10 min，95% B～5% B；10 min～18 min，5% B。c）流量：0.4 mL/min；d）柱温：40 ℃。e）进样量：0.5 μL。7.2.2　质谱参考条件a）电离方式：阳离子电喷雾电离（ESI+）；b）离子扫描模式：多反应监测模式（MRM）；c）毛细管电压：4000 Vd）解簇电压：50 Ve）干燥气温度：300 ℃f）干燥气流量：10 L/ming）雾化气压力：50 Psih）监测离子范围：m/z 50~800。i）定性、定量离子见表1：表1  γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的优化电压参数加合物种类　离子对　碰撞电压（eV）γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛　241/155a241/69241/87　-16-22-22a  为定量离子7.2.3　标准曲线的绘制取5.4中的γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准溶液（100 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L、2000 μg/L、3000 μg/L、4000 μg/L），按照色谱参考条件（7.2.1）进行测定，以标准系列中加合物的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。7.2.4　样品的测定取样品溶液和标准溶液各 0.5 μL注入液相色谱进行分析，以其标准溶液目标峰的保留时间进行定性，根据峰面积计算样品中待测物质的含量。加合物的总离子流图和质谱图见附录A。7.2.5　空白实验除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。8　试验数据处理样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，按照公式（1）计算：…………………………………………（1）式中：х—— 样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，微克/千克（μg/kg）；C —— 样品中加合物的浓度，微克/升（μg/L）；V —— 被测样品的总体积，毫升（mL）；D —— 样品稀释倍数；M —— 称取样品的质量，克（g）。计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9　精密度9.1　一般规定本文件的精密度按照GB/T 6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以 95% 的可信度来计算。9.2　重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。9.3　再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。10　试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容：——试验对象；——所使用的标准；——所使用的方法；——结果；——观察到的异常现象；——试验日期。附录A（资料性附录）γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物总离子流图及质谱图