主要技术内容:4 野生抚育基地选址4.1 全国及山西主要产区酸枣仁含量测定研究由于酸枣仁药材中斯皮诺素含量各地不一致，存在不少产地含量不合格的现象，因此野生抚育地的选址要选择在当地的野生酸枣仁含量达标并较高的区域。考虑到有些抚育地可以适当补栽，为了保持抚育地的酸枣仁药材质量一致性，补栽的种源且选择当地的野生酸枣仁，种子育苗或种子直接播在抚育基地中。4.1.1样品收集2016年在酸枣仁药材加工集散地进行了取样，然后2017年则进行了系统的原产地调查，收集样品，共收集了74份样品（其中2016年42份，2017年32份），利用课题组前期建立的含量测定方法，对其中的三萜皂苷（酸枣仁皂苷A和皂苷B）和黄酮（斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素）两类4个主要成分进行了测定。样品信息来源见表3~表4，其中2016年样品收集方式为：于酸枣仁产新期（8月中旬-10月上旬）后的10月下旬，在三大酸枣仁加工集散地（河北赞皇、山东汶上和河北内丘），经中药材天地网信息站和各集散地专营商户的协助，向各加工商户追踪药材原产地，收集加工好的酸枣仁药材，每份不少于100 g；2017年的样品收集方式为：9月下旬到10月上旬直接到各个主要产区自行采集，即每个产区采集3个产地，每个样品来自20株以上个体，每个个体采集约20粒果实，其中河北内丘、涉县和北京百望山三个产地，取了3个重复的样品，晾干果实去果肉去壳。4.1.2 结果与分析样品的含量结果见表5~表6。表3  2016年酸枣仁中两种黄酮和两种皂苷的含量测定（n=3)产区　产地　样品编号　斯皮诺素%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷A/%　酸枣仁皂苷B/%东北产区　辽宁朝阳　DB16-1　0.081　0.056　0.046　0.023辽宁朝阳　DB16-2　0.075　0.051　0.046　0.019辽宁葫芦岛　DB16-3　0.077　0.046　0.050　0.025辽宁凌源　DB16-4　0.055　0.021　0.016　0.012辽宁凌源　DB16-5　0.082　0.047　0.024　0.012山东汶上产区　山东济南　WS16-1　0.081　0.050　0.053　0.018山东济南　WS16-2　0.091　0.048　0.061　0.018山东济南　WS16-3　0.079　0.049　0.054　0.022山东济南　WS16-4　0.079　0.055　0.049　0.021山东淄博　WS16-5　0.082　0.066　0.052　0.023山东淄博　WS16-6　0.085　0.048　0.057　0.023山东淄博　WS16-7　0.092　0.049　0.061　0.028山东临沂　WS16-8　0.089　0.051　0.062　0.040山东临沂　WS16-9　0.079　0.042　0.050　0.028山东临沂　WS16-10　0.092　0.072　0.045　0.023山东枣庄　WS16-11　0.083　0.053　0.056　0.029山东枣庄　WS16-12　0.088　0.051　0.061　0.018山东日照　WS16-13　0.081　0.042　0.045　0.018山东潍坊　WS16-14　0.087　0.053　0.054　0.021山东东平　WS16-15　0.084　0.052　0.060　0.024河北赞皇产区　河北邢台内丘　ZH16-1　0.082　0.061　0.056　0.028河北石家庄元氏　ZH16-2　0.060　0.042　0.052　0.024河南洛阳　ZH16-3　0.089　0.060　0.049　0.024河北唐山产区　河北唐山　TS16-1　0.078　0.055　0.034　0.016河北唐山　TS16-2　0.081　0.046　0.032　0.008陕西产区　陕西　SAX16-1　0.078　0.043　0.044　0.046陕西　SAX16-2　0.077　0.054　0.031　0.011陕西眉县　SAX16-3　0.097　0.035　0.024　0.016陕西渭南　SAX16-4　0.077　0.061　0.054　0.029山西产区　山西临汾　SX16-1　0.081　0.061　0.045　0.015山西临汾大宁　SX16-2　0.075　0.034　0.030　0.009山西临汾大宁　SX16-3　0.085　0.049　0.034　0.014山西临汾吉县　SX16-4　0.102　0.049　0.047　0.011山西临汾吉县　SX16-5　0.095　0.056　0.045　0.015山西安泽整片　SX16-6　0.083　0.040　0.033　0.014山西襄垣马岭垴　SX16-7　0.069　0.051　0.023　0.012山西沁县北上寺村　SX16-8　0.073　0.051　0.032　0.010山西武乡县东寨底村　SX16-9　0.052　0.031　0.026　0.013山西黎城东阳关　SX16-10　0.078　0.041　0.034　0.010山西高平　SX16-11　0.067　0.031　0.041　0.011甘肃产区　甘肃　GS16-1　0.078　0.058　0.044　0.011甘肃　GS16-2　0.069　0.058　0.033　0.008表4  2017年酸枣仁中两种黄酮和两种皂苷的含量测定结果（n=3）产区　产地　样品编号　斯皮诺素/%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷A/%　酸枣仁皂苷 B / %东北产区　辽宁朝阳　DB17-1　0.053　0.045　0.035　0.005辽宁喀左　DB17-2　0.065　0.053　0.039　0.009辽宁建昌　DB17-3　0.126　0.085　0.048　0.007山西产区　山西万荣　SX17-1　0.049　0.032　0.050　0.010山西临汾县底镇　SX17-2　0.112　0.084　0.048　0.016山西翼城　SX17-3　0.054　0.041　0.038　0.007陕西产区　陕西乾县　SAX17-1　0.078　0.059　0.042　0.011陕西澄城　SAX17-2　0.079　0.056　0.044　0.006陕西合阳　SAX17-3　0.101　0.067　0.049　0.009山东产区　山东莱芜茶业口镇　SD17-1　0.064　0.026　0.033　0.019山东枣庄市　CQSD17-2　0.079　0.057　0.036　0.008山东临沂沂水县　CQSD17-3　0.083　0.050　0.046　0.013山东济南长清区万德镇　CQSD17-4　0.089　0.056　0.046　0.014甘肃产区　甘肃庆阳市宁县　CQGS17-1　0.080　0.045　0.046　0.007甘肃庆阳市镇原县　GS17-2　0.107　0.069　0.052　0.010甘肃平凉市灵台县　GS17-3　0.078　0.048　0.044　0.007河南产区　河南三门峡市陕县　HN17-1　0.078　0.053　0.043　0.012河南林州市　HN17-2　0.088　0.059　0.054　0.007河南三门峡市灵宝县　HN17-3　0.085　0.064　0.047　0.016河北唐山产区　河北唐山迁安市　TS17-1　0.096　0.044　0.041　0.009天津蓟县　TS17-2　0.099　0.055　0.045　0.010河北唐山迁西县　TS17-3　0.071　0.051　0.047　0.006河北赞皇产区　河北石家庄元氏县　ZH17-1　0.088　0.042　0.051　0.021河北内丘　ZH17-2-1　0.069　0.053　0.039　0.010河北内丘　ZH17-2-2　0.072　0.052　0.036　0.017河北内丘　ZH17-2-3　0.058　0.047　0.033　0.019河北涉县　ZH17-3-1　0.144　0.086　0.038　0.009河北涉县　ZH17-3-2　0.137　0.088　0.038　0.010河北涉县　ZH17-3-3　0.128　0.080　0.046　0.010北京海淀百望山　ZH17-4-1　0.080　0.041　0.038　0.022北京海淀百望山　ZH17-4-2　0.066　0.037　0.033　0.019北京海淀百望山　ZH17-4-3　0.079　0.032　0.038　0.037表5  2016年酸枣仁不同产区含量平均值结果产地　斯皮诺素/%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷 A / %　酸枣仁皂苷 B / %东北产区　0.074±0.011a　0.044±0.014a　0.037±0.015b　0.018±0.006a山西产区　0.078±0.014a　0.045±0.010a　0.038±0.015a　0.012±0.002a陕西产区　0.082±0.010a　0.048±0.012a　0.038±0.014ab　0.026±0.016a山东汶上产区　0.085±0.005a　0.052±0.008a　0.062±0.006b　0.024±0.006a甘肃产区　0.074±0.006a　0.058±0.001a　0.039±0.008ab　0.010±0.002a河北唐山产区　0.080±0.002a　0.050±0.006a　0.033±0.003ab　0.012±0.006a河北赞皇产区　0.077±0.015a　0.054±0.011a　0.052±0.004b　0.025±0.002a表6  2017年酸枣仁不同产区含量平均值结果产区　斯皮诺素/%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷A/%　酸枣仁皂苷B/%东北产区　0.081±0.039a　0.061±0.021a　0.045±0.007a　0.007±0.002a山西产区　0.071±0.035a　0.052±0.028a　0.050±0.007a　0.011±0.004a陕西产区　0.086±0.013a　0.060±0.006a　0.050±0.004a　0.009±0.002a山东产区　0.079±0.011a　0.047±0.014a　0.045±0.008a　0.014±0.004a甘肃产区　0.088±0.016a　0.054±0.013a　0.053±0.005a　0.008±0.002a河南产区　0.083±0.005a　0.059±0.006a　0.054±0.006a　0.012±0.004a河北唐山产区　0.089±0.015a　0.050±0.006a　0.049±0.004a　0.008±0.002a河北赞皇产区　0.092±0.032a　0.056±0.021a　0.043±0.006a　0.017±0.008a结果显示，2016年度酸枣仁样品中斯皮诺素的含量在0.052～0.102%，6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量在0.021～0.072%，酸枣仁皂苷A的含量在0.016～0.061%，酸枣仁皂苷B的含量在0.008～0.046%。2017年度酸枣仁样品中斯皮诺素的含量在0.049～0.144%，6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量在0.026～0.088%，酸枣仁皂苷A的含量在0.033～0.054%，酸枣仁皂苷B的含量在0.005～0.046%。以不同产区的酸枣仁4种成分的含量为基础，采用IBM SPSS Statistics 19分析软件分别对两年的不同产区的各成分含量进行单因素方差分析。不同产区的含量平均值结果参见表5~表6。结果显示，仅有2016年的酸枣仁皂苷A的含量具有显著差异，其他成分（包括2017年的4种成分，以及2016年的3种成分）均无显著差异，说明不同产区间的酸枣仁成分含量差异不明显。或者各产区内不同产地之间的差异和产区间差异相当。从全部产地的样品含量来看，斯皮诺素含量高的有山西临汾（包括大宁和吉县）、河北涉县、河北迁安、甘肃庆阳、陕西眉县、陕西合阳、辽宁建昌、天津蓟县，也即各大产区均有含量高的地点，各大产区内不同产地含量差异比较大，而山东产区的各产地含量则较为均匀而普遍稍高。酸枣仁皂苷A含量高的地点多集中在山东，以及河北内丘和陕西渭南。综合两类成分，山东产区的含量均较高，且区域内含量较为均匀。4.2野生抚育地通过资源调查全面地、深入地了解产地及产地周围的环境质量状况，并且结合有效成分含量测定，旨在选择有效成分高的种质，产地面积大，在该产地建立酸枣仁的野生抚育基地。经2016和2017年全国各地产酸枣仁的含量比较研究研究，山西省大宁、吉县等地各质量指标成分均达标，且高于其他产地，因此山西省野生抚育基地选择在山西大宁。从上一节的研究数据看，还可以选择的基地还有：山西吉县、河北涉县、辽宁建昌等地。5、酸枣野生抚育基地的建设5.1 山西大宁野生抚育措施5.1.1 除杂定距基地为野生环境，酸枣树下和树旁多野生杂草和灌木，首先，除杂草、清灌丛。然后按株行距约为1-2m×3m，将过密成片而人不可达的地方，开出2-3m的通道，株间过密而影响生长的地方，根据留大去小、留强去弱、留幼去老（老枝指的是枣股已经在10年以上，不再结果）的原则，使株距大致1-2m，行距3m。5.1.2 补种种子抚育区内酸枣密度小的地方坡地和平地修鱼鳞，一般坡地株距 2~4m，行距 3~5 m；平地株行距为 2 m×3 m。选择抚育区内优良母株的种子，雨季播种。5.1.3 补种种苗在阳坡（南坡）和半阴坡（东坡和西坡）缓坡（坡度小于30°）非连片区，以及抚育区域内的大片空地区域，进行补苗，上一年度秋季挖好鱼鳞坑或者同年夏天，株行距平地1m×2m，坡地1m×2m。2018年春季将育苗基地的酸枣苗补种其中。先挖穴，穴径和深各50cm。先挖松穴底，整平，每穴施土杂肥8kg，与底土拌匀，再盖10cm厚细土。每穴栽1株，覆土压紧，浇透定根水。用薄膜覆盖，6月下旬去掉薄膜，对鱼鳞坑进行维护。5.1.4 修剪整枝酸枣为喜光植物，必须进行合理的整形修剪，修剪目的和措施为：①改善树冠内的透光性，以提高坐果率，增加产量，措施是剪去拥挤枝、交叉枝、重叠枝、直立枝、徒长枝、老弱病虫枝，均衡树势和改善通风透光条件。②去老留幼：一些老的枝干，枣股已经过老，不结果了，去掉，保留旁边已有幼枝或促进新枝萌发，后续形成新的结果枝。③改善树形，进行树形改造， 把主干1m以上的部位锯去，使抽生多个侧枝，形成树冠，对于过高的枣树，也伐掉顶端难以采集酸枣的枝子。5.1.5 去病株去寄生去掉区域内枣疯病的植株或整枝，生长期去掉寄生的菟丝子。5.1.6 病虫害调查和防治全生长期调查和收集病虫害状况，并鉴定，进行防治方法实验。5.2 结果与分析5.2.1 补种结果2017年早春4月修好鱼鳞坑，在6月下旬播种，每窝3-5粒种子，共播种500窝，2017年9月统计出苗率为72%，2018年4月下旬统计存活率为55%，2018年9月存活率为49%。2018年补种3000窝，加大补种密度，株距减少为1m，平地行距2m，坡地3m，9月统计出苗率为81%。2018年抚育基地降雨量大是出苗率提高的主要原因。5.2.2 补苗结果种苗补种，选择壮苗，成活率较补种种子稍高，但由于主根受损，扎根不如种子苗，后期抗旱能力和存活力尚待评估。2018年春季将育苗基地的酸枣苗补种到抚育区1000株，2018年秋季统计成活率为28%，且根系生长情况不及种子播种。5.2.3 整形与修剪对单株产量的影响2018年早春在山西大宁基地设计整形修剪，在基地选择大小植株相当的酸枣树90棵，分为修剪组和未修剪组，每组三个重复，每个小组植株为15株，修剪组按照5.1.4项下的修剪方法进行修剪，在酸枣成熟期收集酸枣样品。结果参见表7。表7 酸枣树野生状态修剪前后产量的变化项目　调查年份　小组产量/g　平均株产/g1　2　3野生状态不修剪　2018年　3650　3470　3815　243野生状态修剪后　2018年　4311　4068　4697　290由以上数据可得，修剪后酸枣的单株较修剪前平均增加产量约为19.3%，可见，适当修剪对提高酸枣的产量有一定的帮助。5.2.4 酸枣树老枝和新枝上酸枣仁质量差异分析老枝指的是枣股8年以上的枣股分枝，新枝为1-3 枣股分枝，本课题组在酸枣大宁基地设计实验，在2018年7月份选择3棵生长年限长、植株茂盛、结果比较多的酸枣树，分别在酸枣树的老枝和新枝上挂牌，在酸枣的成熟期9月下旬，采样，老枝和新枝上采样量分别不少于100颗酸枣，3棵树为一个重复，共3个重复，老枝编号为LZ-1，LZ-2，LZ-3，新枝编号为XZ-1，XZ-2，XZ-3，样品收集后晾干果实去果肉去壳。按课题组前期建立的测定方法测定四种成分的含量，结果参见表8。表8 酸枣树老枝和新枝上酸枣仁质量差异分析产地　样品编号　斯皮诺素/%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷A/%　酸枣仁皂苷B/%山西大宁基地　LZ-1　0.057　0.031　0.037　0.021XZ-1　0.063　0.035　0.038　0.023LZ-2　0.072　0.036　0.029　0.023XZ-2　0.077　0.042　0.033　0.027LZ-3　0.060　0.027　0.032　0.019XZ-3　0.067　0.032　0.035　0.024由表9的数据可得，老枝和新枝上酸枣仁的四种成分含量存在差异，新枝较老枝上四种成分的含量均有所提高，斯皮诺素含量提高9.52%，6′′′-阿魏酰斯皮诺素含量提高15.96%，酸枣仁皂苷A提高8.16%，酸枣仁皂苷B提高17.46%。因此，适当修剪老枝，促进新枝萌发有利于提高酸枣仁的整体质量。5.2.5 不同密度对酸枣仁质量和产量的影响在山西大宁野生抚育基地，选择3块酸枣树长势相当面积分别为5×5m的阳坡地，作为实验用地，除杂定距，适当修剪，地块一将株距定为1m×1m，保留酸枣树25株，地块二将株距定为1m×2m，保留酸枣树13株，地块三将株距定为2m×2m，保留酸枣树7株，在酸枣的成熟期2018年9月下旬，分别收集三块地的酸枣，三块地的总产量及单株产量，并取样进行四种成分的含量测定，结果参见表9~表10。表9 不同密度对酸枣树产量的影响(n=3)项目　株行距　总产量/g　单株均产量/g地块一　1m×1m　5045.0　201.8地块二　1m×2m　5120.3　393.9地块三　2m×2m　2864.4　409.2表10 不同密度对酸枣仁中四种成分含量的影响(n=3)项目　株行距　斯皮诺素/%　6′′′-阿魏酰斯皮诺素/%　酸枣仁皂苷A/%　酸枣仁皂苷B/%地块一　1m×1m　0.062±0.003a　0.031±0.001a　0.036±0.001a　0.027±0.001a地块二　1m×2m　0.075±0.001b　0.037±0.002b　0.034±0.001a　0.028±0.001a地块三　2m×2m　0.076±0.001b　0.036±0.001b　0.036±0.002a　0.027±0.002a有以上数据可得，密度过大和密度过低均会影响基地的酸枣产量，当株行距为1m×1m时单株均产量为201.8g，当株行距疏密为1m×2m时，单株产量提高了95.19%，总产量提高约为1.49%，当株行距疏密为2m×2m时，单株产量较株行距1m×2m提高了3.88%，相同面积的地块产量降低了44.06%。因此，在野生抚育基地，适当疏密可以提高抚育基地酸枣的产量，这和酸枣最适应的生长环境（充足的光照和透风）有关。密度过大同样会影响酸枣的质量，当株行距疏密为1m×2m和2m×2m时，黄酮类成分斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量均有显著提高，分别提高20.97%和19.35%，皂苷类成分无显著提高。可见，黄酮类成分的合成对环境的要求更高。5.2.4 病虫害调查结果及采取的防治方法在2018年5月-9月在山西大宁野生抚育基地进行了病虫害调查，并对相应的病虫害采取了一定的防治措施，结果参见表11。表11 山西大宁野生抚育基地病虫害调查结果及防治方法病害　发病特点　防治方法枣疯病　枣疯病呈现典型的黄化丛枝型病症，病原菌是一种支原体，存在于寄主的筛管和伴细胞中，通过胞间连丝沟通传染。此外，叶蝉等昆虫是该病菌的自然传播媒介。发病后树体生长不良，分生细胞组织被破坏，大量营养被消耗，出现叶片黄化、小枝丛生等现象　铲除已发病病株并对其进行彻底焚烧，避免交叉感染枣锈病　在多雨、高湿的气候条件下容易发生病害，病菌破坏叶片的组织结构，致使酸枣光合作用受阻，果实吸收营养不畅，降低果实品质。 　合理修剪，使通风条件良好，扫除病落叶，集中烧毁红蜘蛛　以成虫、幼虫吸取芽、果实或叶片内的汁液，酸枣叶被害后叶片就会变黄枯落，树干留下白色斑点，严重影响产量 　铲除已发病病株并移出基地焚烧菟丝子缠绕株　植株矮小，结果量降低，甚至不结果，更有甚者植株枯死　及时清除植株周围的菟丝子