范围:本标准界定了永川香珍相关的术语和定义，规定了永川香珍菌种的制作、菌种场的设置与技术要求、母种制作、母种制作、栽培种制作、液体菌种制作、菌种质量要求、抽样及菌种质量检验、菌种的标签、标志、包装、运输及贮存、栽培技术要求、病虫害防治以及采收与分级技术要求。 本标准适用于室内栽培的永川香珍秀珍菇鲜品; 主要技术内容:永川香珍1　范围本标准界定了永川香珍相关的术语和定义，规定了永川香珍菌种的制作、菌种场的设置与技术要求、母种制作、母种制作、栽培种制作、液体菌种制作、菌种质量要求、抽样及菌种质量检验、菌种的标签、标志、包装、运输及贮存、栽培技术要求、病虫害防治以及采收与分级技术要求。本标准适用于室内栽培的永川香珍秀珍菇鲜品。2　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5749-2006 生活饮用水卫生标准GB 19172-2003 平菇菌种GB/T 12728-2006 食用菌术语NY 5099-2002 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求NY/T 391-2013 绿色食品 产地环境质量NY/T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程NY/T 1846-2010 食用菌菌种检验规程NY/T 1935-2010 食用菌栽培基质质量安全要求3　产地范围永川香珍生产地域的自然地理范围为：东经105°38′—106°05′，北纬28°56′—29°34′之间，幅员总面积1576平方千米。永川香珍生产地域的行政区划为辖区内全部23个镇街。4　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。4.1永川香珍 Sweet Mushroom of Yongchuan是永川区春早、秋迟、冬暖、无霜期长，雾多风小日照短，空气湿润阴雨多的独特气候环境条件下生产的秀珍菇，其菌盖呈扁半球至平展，倒卵形或近扇形，光滑，边缘平滑或稍呈波状，直径4 cm～10 cm，白色、灰色至灰褐色；菌柄偏生或侧生，内实，光滑，短或无，有绒毛，后期近光滑，内部实心至松软，白色；菌褶延生，稍密，不等长，白色；菌肉靠近基部稍厚，白色；孢子印灰白色；孢子近圆柱形，光滑，（8.1μm～10.7μm）×（3μm～5.1 μm），无色透明。具有菇形好，菇肉厚实，菇香浓郁，口感鲜嫩，营养价值和保健价值高的独特品质。4.2母种经选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，也称一级种、试管种。[来源：NY/T 528-2010，3.3]4.3原种由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或聚丙烯塑料袋为容器。[来源：NY/T 528-2010，3.4]4.4栽培种由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。[来源：NY/T 528-2010，3.5]4.5接种菌种移植到培养基物中的操作。[来源： GB/T 12728-2006，2.4.41]4.6无菌操作在无菌条件下的操作过程。[来源： GB/T 12728-2006，2.5.14]4.7液体菌种培养基为液体状态的菌种。[来源： GB/T 12728-2006，2.5.30]4.8PDA马铃薯葡萄糖培养基。4.9培养平板固体培养基在无菌培养皿中冷却凝固形成的平面培养基称为培养平板，简称平板。4.10添加剂泛指培养料中的各种化学用品，包括化肥类、无机盐类、植物生长调节剂、杀虫剂、杀菌剂等。[来源：GB/T 12728-2006，2.6.41]4.11转潮期子实体在一定时间内大量发生的现象称为菇潮，菇潮在一个生长周期内可以发生若干次，一个菇潮至下一菇潮的间隔期,称为转潮期。5　菌种场的设置与技术要求5.1选址场址应距离禽畜场、垃圾场和医院等污染源1000 m以上，交通方便。5.2 能源供应场内有稳定的水源、电源、供热设备。5.3 设计要求各作业室干净整洁，布局利于无菌作业的流程，做到既相连又相隔。5.4 菌种场作业室及主要设施设备要求菌种场作业室及主要设施设备要求见表1。表1　菌种场作业室及主要设施设备序号　名称　用途　设施及条件　主要仪器设备1　母种实验室　母种的扩繁　通自来水，220 V电源，洁净等级为十万级，建筑面积按实际需要确定　超净工作台、培养箱、普通光学显微镜、高压灭菌器、玻璃器皿、电子天平、电炉、微波炉、摇床、小型发酵罐2　备料室　培养料配制、分装　通自来水，220 V及 380 V电源，建筑面积按实际需要确定　拌料机、装袋机3　灭菌室　培养料灭菌　通自来水，220 V及 380 V电源，建筑面积按实际需要确定　高压灭菌器或常压灭菌器4　冷却室　灭菌后培养料的冷却　220 V及 380 V电源，建筑面积按实际需要确定，洁净等级为千级　空调系统、臭氧消毒机、新风系统5　缓冲间　进入无菌操作室前的准备工作　220 V电源，建筑面积按实际需要确定，洁净等级为千级　洗手台、空调系统、臭氧消毒机、新风系统、作业服装专用柜6　接种室　接种作业　220 V及 380 V电源，建筑面积按实际需要确定，洁净等级为百级　层流罩、接种操作台面、空调系统、新风系统、臭氧消毒机7　菌种培养室　培养菌种　220 V电源，建筑面积按实际需要确定，洁净等级为十万级　培养架、空调系统、臭氧消毒机、新风系统8　菌种保存库　贮存菌种　220 V及 380 V电源，建筑面积按实际需要确定，温度要求：1℃～5℃　制冷机组、保温库6　母种制作6.1 试管规格及要求宜采用18mm×180mm的玻璃试管。6.2 试管培养基制作新鲜无病害马铃薯洗净去皮，切成小薄片，取200g，加自来水1000mL，置于容器内煮沸20min后过滤，取滤汁加葡萄糖20g、蛋白胨1g～2g、KH2PO4 0.1g～0.2g、琼脂20 g，煮溶后用水补足至1000mL。将培养基分装至试管的2/5处，擦拭干净沾在试管口上培养基，塞上试管塞，用牛皮纸或报纸包装后灭菌，不可过夜放置。也可选用商品马铃薯葡萄糖培养基（PDA培养基）。将包好的试管 （试管塞朝上）垂直放入高压灭菌器，在0.105MPa压力下，121℃灭菌20min。灭菌后的试管后趁热倾斜摆放形成斜面，斜面顶端应距离试管塞40mm～50mm，培养基未凝固前不宜再移动。6.3 接种室消毒接种前1 d应用臭氧消毒机对接种室消毒20min～30min，接种前60 min再消毒20min～30min。臭氧消毒结束30min后操作人员方可进入接种室，防止臭氧中毒。6.4 接种6.4.1准备工作操作人员进入缓冲间，应更换已消毒的洁净衣帽，戴上口罩，用消毒液清洁手部。6.4.2 操作方法在超净工作台内，按照无菌操作要求，用灼烧冷却后的接种工具从母种管切取3mm见方菌种块，迅速转接入待转接试管的培养基上，用酒精灯火焰灼烧试管口和试管塞后塞紧管口。1支母种管的转接量宜控制在30支～50支。接种后应及时贴上菌种标签，注明菌种名称（代号）、接种人、接种日期。6.5 母种培养及保存转接后的试管，25℃±1℃恒温培养至菌丝满管。满管后应及时置于4℃冰箱中，存放时间不超过180d。7　原种制作7.1  培养料配制7.1.1 配方见附录A。7.1.2 配制方法将配方表中的原材料混合拌匀，补足水分，使培养料含水量达到60%～70%。7.2 装瓶（袋）消毒液或洁净剂洗净容器后用清水冲刷干净。配制好的培养料及时装瓶（袋）至容器肩部，750mL菌种瓶培养料填充量不超过400g（湿重）；18cm直径的菌袋，装袋高度不应超过18cm，填充量不超过1200g。装瓶（袋）完成后用干净毛巾将容器璧擦拭干净，容器口盖上透气盖或用棉花塞紧。7.3 灭菌宜高压蒸汽灭菌，0.105Mpa  121℃下灭菌180min。常压灭菌100℃±1℃灭菌12h。7.4 接种室消毒同6.3。7.5 原种接种7.5.1操作方法在超净工作台或层流罩内，按照无菌操作要求，用接种工具将母种切取成8mm～10mm的菌种块后迅速转转移到原种培养料表面上，或放入培养料接种孔内，盖上封口物，转接结束。1支母种管转接不超过20瓶（袋）原种。接种后应及时贴上菌种标签，注明菌种名称（代号）、接种人、接种日期。7.5.2 培养及保存原种应在24 ℃±1℃，空气相对湿度55%～65%，CO2浓度2000ppm±50ppm下避光培养。满瓶后的原种应尽快使用，在不超过25℃、空气相对湿度50%～70%、避光室内存放不超过14 d。4℃下贮存不超过45d。8　栽培种制作宜在超净工作台或层流罩内，按照无菌操作要求，用接种工具将瓶（袋）口的老化菌种块去掉，取出2 cm见方的菌种块迅速转转移到栽培种培养料上，盖上封口物，转接结束。依次操作剩余的菌种袋。1瓶（袋）原种的转接量不应超过50瓶（袋）。接种后应及时贴上标签，注明菌种名称（代号）、接种人、接种日期。栽培种应尽快使用，在温度不超过25℃、相对湿度50%～70%、避光的室内存放不超过15d。在1℃～6℃下贮存时，贮存期不超过45d。9　液体菌种制作9.1 菌种活化取5mm见方秀珍菇母种接种于90mm PDA培养平板中央，于25℃恒温培养7d。9.2 一级液体菌种培养250mL三角瓶内分装100mL液体培养基，灭菌冷却。取1.5cm见方母种分割成为1mm见方菌种块，通过无菌操作接种于前述三角瓶内，于25℃、150r/min～200r/min下振荡培养7d。培养基配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨1g～2g、KH2PO4 0.1g～0.2g。9.3 二级液体菌种培养按10%接种量将一级液体菌种接种于发酵罐内，通气量4.0 L/min，转速 200r/min～350 r/min，25℃下培养7d。液体菌种宜现做现用。培养基配方同9.2。10  菌种质量要求应符合 GB 19172-2003 的规定。11  抽样及菌种质量检验各级菌种的检验规程按NY/T 1846-2010 的规定进行。各级菌种中杂菌及害虫的检验按NY/T 1846-2010的规定进行。12  菌种的标签、标志、包装、运输及贮存按GB 19172-2003 的规定进行。13  栽培技术要求13.1 菌种选择宜选用种性明确，经过两个以上生产周期试验，适合于当地气候条件的秀珍菇品种。13.2 产地环境秀珍菇产地环境场地环境应符合NY/T 391-2013的规定。生产用水应符合GB 5749-2006的规定。13.3 栽培季节具有周年生产条件的，其栽培季节不限。不具备周年生产条件的，菌包制作季节宜在每年1月～4月，出菇季节为5月～10月。13.4 栽培基质栽培基质配方参照附录C执行，基质原料要求应符合NY 5099-2002 和NY/T 1935-2010 的规定。添加剂的种类、用量和使用方法应符合NY 5099-2002 和NY/T 1935-2010 的规定。13.5 制袋13.5.1 拌料先将栽培基质各原料（干）混合均匀，再按料水比1∶1.1～1：1.3充分拌料，使培养料的含水量为60%～70%，pH值调节为7.0～8.0。13.5.2 装袋宜选用36cm×18cm×0.005cm聚丙烯或聚乙烯塑料袋，使用装袋机或手工填充栽培基质，高度20cm，重量1500g±100g（湿重）。装袋完成后将菌袋外壁擦拭干净后，用套环、无纺布过滤片和透气盖封口。栽培基质应在4h内完成装袋，避免时间过长导致培养料酸化。13.6 灭菌和接种13.6.1 灭菌装袋完成后应立即灭菌。宜按以下程序进行高温蒸汽灭菌：排气2次后，105℃ 30 min，115℃ 30 min，121℃ 120 min，焖置30 min。若灭菌器满负荷时，121℃保压延长至180min。若采用常压灭菌，温度应在4 h内达到100℃，并100℃保温16h～18h。13.6.2 接种接种前应对接种室、接种箱采用药物、紫外线或臭氧进行消毒处理。药物选用及消毒方法见附录B栽培料温度应降到28 ℃以下方可接种。操作按NY/T 528-2010规定进行。每瓶（袋）栽培种的转接量不宜超过50袋。液体菌种接种量为10mL/袋。13.7 菌丝培养13.7.1 培养环境培养室应保持清洁、干燥、遮光、通风，保温性能好。13.7.2 培养方法宜采用层架式发菌。培养条件同7.7。接种后每5d～7d检查一次，污染的菌包应及时无害化处理。菌丝满袋后应继续在同等条件下后熟10d。13.8 出菇13.8.1 菇房要求菇房应清洁干净，通风良好，有散射光，可调节温度和空气湿度，1m范围内不得有杂草。菇房两侧安装出菇网格架，中间宜设置1m宽主通道；在主通道垂直方向设置菇架，每排菇架前后间距宜不少于1m。13.8.2 出菇条件出菇房温度宜控制在16℃～30℃，最适温度22℃；CO2浓度不宜超过2000ppm；空气相对湿度80%～90%。宜用LED灯带（白光）每8h 补光1次、每次时长30min。13.8.3 催蕾与出菇管理13.8.3.1 催蕾菌包后熟后，移至菇房环割开袋，采用低温和水分刺激进行催蕾。先将菇房温度调节至14℃±1℃处理24h后将菇房温度调节至25℃±1℃，用雾状水喷洒袋口，直至有水滴滴下。保持菇房湿度75%～85%，CO2浓度1000ppm以下，用LED（白光）每8h补光1次、每次时长30min。13.8.3.2 出菇管理袋口出现牙签大小的菇蕾时，将CO2浓度调至2000ppm～3000ppm。菇柄长度达到3cm后，将CO2浓度调至1000ppm±50ppm。菌盖达到1.5cm时，应雾状补水至水滴滴下。菌盖达到4cm时即可采收。期间补光，方法同12.8.2。13.8.4 转潮期管理待前一潮菇出菇结束后，　清除菇根，雾状补水至水滴滴下。转潮期菌丝培养条件同7.7。菌包经过10 d～25 d的菌丝再培养后方可以进行下一菇潮的催蕾出菇，催蕾条件同12.8.3.1，出菇条件同12.8.3.2。14 病虫害防治14.1 主要病虫害常见病虫害主要有黄枯病、木霉、毛霉、链孢霉和菇蝇、菇蚊。14.2 对病虫害的防治在生产管理过程中，做好场地清洁消毒处理的同时，对木霉、毛霉和链孢霉感染菌包应及时无害化处理；加大菇房的通风量和菇房内部的空气循环，减轻黄枯病危害；悬挂黄色粘虫板或蓝色粘虫板诱杀菇蝇和菇蚊。15 采收与分级当菌盖达到4 cm即可采收，按表2所列标准进行分级。表2　永川香珍鲜品感官要求项目　指标AA级　A级　B级色泽　菌盖灰白色至灰褐色气味　具有秀珍菇特有的菇香，无异味形态　菌盖呈匙形至扇形，菌柄直，菌盖厚实，边缘稍有内卷，不开裂　菌盖近匙形或呈扇形，菌柄稍直，菌盖较厚实，边缘平展，不开裂　菌盖呈扇形至半球形，菌柄稍直，菌盖薄，边缘稍有上翻，有少量开裂菌盖直径，cm　4.0～6.0　7.0～8.0　≤4.0，≥8.0菌柄长度，cm　4.0～6.0　3.0～5.0　≤3.0碎菇，%　无　无　≤5.0附着物，%　无　无　≤0.5虫伤菇，%　无　无　≤2.0杂质　无附 录 A（规范性）永川香珍常用原种和栽培种培养基及其配方表3　表A.1 永川香珍常用原种和栽培种培养基及其配方培养基种类　配 方棉籽壳培养基　棉籽壳83%，麦麸15%，石膏1%，石灰1%，含水量60%～65%。木屑培养基　杂木屑78%，麦麸20%，石膏1%，石灰1%，含水量60%～65%。混合培养基　棉籽壳58%，杂木屑20%，麦麸20%，石膏1%，石灰1%，含水量60%～65%。附 录 B（规范性）永川香珍生产环境、接种器具可选用的化学消毒剂表4　表B.1 永川香珍生产环境、接种器具可选用的化学消毒剂名 称 　使用浓度 　施用对象 　使用方法乙 醇 　75% 　手、接种工具，接种操作台面，原种瓶表面等 　浸泡或涂擦二氯异氰尿酸钠　每m3使用4～8 g　培养室、无菌室、接种箱　点燃烟熏0.5 h每7 L水使用10 g　场地、菇棚、床架　擦拭或喷洒10 min，现配现用酚皂液(来苏儿) 　0.5%～2% 　无菌室、接种箱、栽培房及床架 　喷雾1%～2% 　皮肤 　涂擦3% 　接种器具 　浸泡新洁尔灭 　0.25%～0.5% 　皮肤，不能用于器具、培养室、无菌室、接种箱 　浸泡、喷雾漂白粉 　10% 　接种工具、原种瓶表面等 　现用现配，浸泡1% 　栽培房和床架 　现用现配，喷雾硫酸铜/石灰 　硫酸铜1 g、石灰1 g、水100 g 　栽培房和床架 　现用现配，喷雾、涂擦附 录 C（规范性）永川香珍常用栽培基质及其配方表5　表C.1 永川香珍常用栽培基质及其配方序 号 　配方内容配方一 　杂木屑38.5%，棉籽壳 38％，麦麸15％，玉米粉5％，石膏2％，石灰1.5％。配方二 　棉籽壳50％，杂木屑36.5%，麦麸10％，石灰1.5％，石膏2％。配方三　木屑58.5%，棉籽壳28%，麸皮10%，石灰1.5%，石膏2％