范围:本标准规定了刺梨及其制品中多糖含量测定的紫外分光光度法。 本标准适用于刺梨鲜果、刺梨干果、刺梨果脯、刺梨冻干粉、刺梨喷干粉、刺梨原汁、刺梨浓缩汁等刺梨及其制品中多糖含量的测定; 主要技术内容:4  方法原理多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖并迅速脱水生成糖醛衍生物，糖醛酸衍生物与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490 nm处有特征吸收。5  试剂和材料5.1  试剂除另有规定外，仅使用分析纯试剂和GB/T 6682规定的一级水。5.1.1  葡萄糖（C6H12O6，CAS号：50-99-7）标准品，纯度 ≥ 98.0%。使用前应于105 ℃恒温干燥至恒重。5.1.2  硫酸（H2O4S），ρ=1.84 g/mL。5.1.3  无水乙醇（C2H6O）。5.1.4  苯酚（C6H6O），重蒸馏。5.2  试剂配制5.2.1  葡萄糖对照品溶液（100 mg/L）：称取0.1 g（精确至0.001 g）葡萄糖标准品，置100 mL烧杯中，加少量水溶解，转至1000 mL棕色容量瓶中，加上定容至刻度，摇匀，置4 ℃冰箱中避光保存。5.2.2  80%乙醇溶液：量取无水乙醇80 mL，置100 mL容量瓶中，加水定容至刻度。5.2.3  80%苯酚溶液：称取苯酚80 g（精确至0.01 g），置100 mL烧杯中，加水少量溶解，转移至100 mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，置4 ℃冰箱中避光保存。5.2.4  5%苯酚溶液：量取5 mL80%苯酚溶液（5.2.3），溶于75 mL水中，混匀，现配现用。6  仪器和设备6.1  紫外分光光度计。6.2  高速破壁机。6.3  分析天平，感量为0.0001 g。6.4  超声波提取器。6.5  涡旋振荡器。6.6  离心机，4000 r/min。6.7  组织捣碎机。7  分析步骤7.1  试样制备将刺梨鲜果（3.1）刺梨鲜果去皮、去籽，组织捣碎机打浆，混合均匀，备用；去除刺梨果干（3.2）和刺梨果脯（3.3）中可见杂质，用高速破壁机粉碎，将其制成粉状，备用；刺梨冻干粉（3.4）和刺梨喷干粉（3.5）研磨均匀备用。7.2  试样提取7.2.1  固态试样：取7.1样品0.2 ~ 2 g，精密称定（精确到0.0001 g），置50 mL具塞离心管内，用5 mL水浸润样品，缓慢加入无水乙醇20 mL，同时用涡旋振荡器振摇，使混合均匀，置超声波提取器中超声提取30分钟。提取结束后，离心10分钟，弃去上清液。沉淀用80%乙醇溶液10 mL洗涤后离心5分钟，弃去洗涤液，用水将上述沉淀物转移入圆底烧瓶。加水50 mL，置超声波提取器中超声处理30分钟，滤过，收集滤液；沉淀物再加水超声、滤过，重复2次。残渣洗涤2～3次，洗涤液合并滤液转至200 mL容量瓶中，加水定容至刻度。此溶液为样品测定液（如颜色过深，可通过C18 SPE小柱等进行脱色处理）。如样品多糖含量较高，可适当稀释后再进行分析测定。7.2.2  液态试样：刺梨原汁（3.6）、刺梨浓缩汁（3.7）等液体样品，精密量取样品5~10 mL，置50 mL具塞离心管内，其余操作同7.2.1。7.3  标准工作曲线准确量取葡萄糖对照品溶液（5.2.1）0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL分别置于20 mL具塞试管中，用水补至1.0 mL。加入5%苯酚溶液1.0 mL（5.2.4），然后快速加入硫酸5.0 mL（5.1.2）（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合，静置10分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于30 ℃水浴中反应20分钟，在490 nm处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。7.4  空白试验与试样的测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不添加试样。7.5  试样的测定准确量取试样提取液（7.2)适量，置于20 mL具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0 mL（5.2.4），然后快速加入硫酸5.0 mL（5.1.2）（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合 ，静置10分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于30 ℃水浴中反应20分钟，在490 nm处测定吸光度。若样品多糖含量较高（吸光度不在0.1~0.8之间），可适当稀释后再进行分析测定。8  分析结果的表述8.1  刺梨鲜果、刺梨干果等固态试样样品中多糖含量以质量分数x计，单位以克每百克（g/100g）表示，按式（1）计算：x=0.910-4 ……………………（1）式中：m1——从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克（μg）；V1——样品定容体积，单位为毫升（mL）；V2——比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）；m2——样品质量，单位为克（g）；0.9——葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。计算结果保留至小数点后两位。8.2  刺梨原汁、刺梨浓缩汁等液态试样样品中多糖含量以质量分数x计，单位以克每百毫升（g/100mL）表示，按式（2）计算：x=0.910-4 ……………………（2）式中：m1——从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克（μg）；V1——样品定容体积，单位为毫升（mL）；V2——比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）；V——样品体积，单位为毫升（mL）；0.9——葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。计算结果保留至小数点后两位。9  精密度在重复条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%